流感病毒H7N9核酸试剂盒（荧光PCR法） 25T

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产品型号：25T

品牌：其它品牌

公司名称：广州益满生物科技有限公司

所在地：广东广州

发布时间：2013-05-04

浏览次数：686 次

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产品简介

通过对样本中禽流感病毒H7基因和N9基因的特异性RNA核酸片段分别进行定性检测，可用于临床对可疑感染患者的病原学鉴别诊断。流感病毒H7N9核酸试剂盒（荧光PCR法）流感病毒H7N9核酸试剂盒（荧光PCR法）

产品详细信息

禽流感病毒H7N9（2013）核酸测定试剂盒（荧光PCR法）

Avian influenza virus （H7N9） Real Time RT-PCR Kit

【产品名称】

通用名称：禽流感病毒H7N9（2013）核酸测定试剂盒（荧光PCR法）

英文名称：Avian influenza virus （H7N9） Real Time RT-PCR Kit

【包装规格】 25人份／盒

【预期用途】通过对样本中禽流感病毒H7基因和N9基因的特异性RNA核酸片段分别进行定性检测，可用于临床对可疑感染患者的病原学鉴别诊断。

【检验原理】本试剂盒采用聚合酶链式反应（PCR）技术结合荧光探针技术，对禽流感H7N9特异性核酸片段进行荧光PCR检测。

【试剂盒主要组成成份】

序号	组分		数量		体积／人份
1	H7N9核酸荧光PCR检测混合液		480ul×1		19ul
2	RT-PCR酶		28ul×1		1ul
3		DEPC-H2O		400ul×1
4		阳性对照品		30ul×1

说明：不同批号的组分不可以互换使用。

自备试剂：Trizol；氯仿；75%乙醇；异丙醇或磁珠法RNA提取试剂；本公司可以代为订购或提供销售商联系方式。

【储存条件和有效期】试剂盒应在－20℃及以下温度避光保存，有效期12个月。采用冰盒行运输；荧光PCR检测混合液反复冻融不宜超过3次。

【适用仪器】本试剂盒适用于ABI7000，ABI7300，ABI7500，ABI7900，MJ-chromo4，MX3000P，MX3005P，SmartCyclerⅡ，Rotor-Gene6000，Lightcycler R480，iCycleriQ4，iCycleriQ5，Bio-Rad CFX96，SLAN等多色荧光PCR仪及相应软件。

【标本要求】

人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管（含0.4ml**生理盐水），用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。标本可立即用于检测，也可保存于-20℃待测。【检验方法】

1.流感病毒H7N9核酸试剂盒（荧光PCR法）标本、对照品的核酸裂解处理

用商品化（取得医疗器械许可证）的RNA提取试剂盒处理标本，具体操作参见该试剂盒说明书。

或用Trizol法提取，方法如下：取100?l样品置于1.5ml 离心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100?l氯仿，混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次； 13000rpm离心15min，吸取上层液体，加入等体积异丙醇，颠倒混匀室温静置10min， 13000rpm离心10min，轻轻倒去上清；加入700?l 75%乙醇，颠倒洗涤，13000rpm离心5min，轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，弃尽液体或4000rpm离心5sec，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量吸干液体，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。

2.流感病毒H7N9核酸试剂盒（荧光PCR法）试剂配制

取n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR酶（n为反应管数）,振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。

3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中，然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中，盖好管盖，立即进行PCR扩增反应。

4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上，推荐循环参数设置：

45℃×10min; 95℃×15min;循环一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环45次;单点荧光检测在60℃，反应体系为25?l。

荧光通道检测选择：选用FAM通道。

备注：如使用ABI系列PCR仪，请务必于passive reference 和 quencher处均选择“none”。

5.流感病毒H7N9核酸试剂盒（荧光PCR法） 阈值设定

阈值设定原则以阈值线刚好超过DEPC-H2O的*高点。

6. 流感病毒H7N9核酸试剂盒（荧光PCR法）质量控制：试剂盒各对照品须达到以下要求，否则实验视为无效。

Ct值
FAM通道（检测H7）		HEX/VIC/JOE（检测N9）
DEPC-H2O	UNDET或45		UNDET或45
阳性对照品	≤35		≤35

7. 流感病毒H7N9核酸试剂盒（荧光PCR法）试验结果的判断

通道	Ct值		结果判断
1	FAM+HEX	UNDET或45	样本低于检测限，报告为阴性
2	FAM+HEX	≤43	FAM通道为H7基因阳性； HEX/VIC/JOE通道为N9基因阳性
3	FAM+HEX	43～45	复检一次,如仍为43～45,则报告为阴性